GV3101(pSoup-p19)电击感受态细胞 ,根癌农杆菌电击感受态

别名:
Cas号: 物化性质:
分子式: 熔点:
分子量: 沸点:
EINECS编号: 密度:
MDL号: 储存条件:

GV3101(pSoup-P19) Elec:                                         50μl/支
pGs2(control vector,10ng/μl )                                     10μl
保存条件(保质期):                                          -80℃(12个月) 

基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-p19-tetR)
产品说明
P19蛋白来源于番茄丛矮病毒,可抑制宿主对外源基因的RNA沉默效应,提高异源基因转录本的稳定性,进而促进异源蛋白的表达,广泛应用于转基因植物及烟草叶片,拟南芥叶片,番茄叶片或原生质体的瞬时表达系统中。GV3101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签:gent,赋予GV3101菌株庆大霉素抗性;在GV3101菌株中转入help质粒:pSoup-p19即为GV3101(pSoup-p19)菌株,可帮助pGreen,62SK,pGs2等质粒在农杆菌中复制,同时赋予该菌株四环素(tet)抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。本公司的GV3101 (pSoup-p19)电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>10cfu/ μg DNA;经pGs2-ZH(卡那霉素抗性)质粒(size:40 kb)检测转化效率可达5×10cfu/μg DNA。
 
操作方法
1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入1-5 μg质粒DNA(质粒体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解),用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。
3. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中,加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天

(当平板只含有50 μg/ml kan 时,28培养48 h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif 时,需28培养60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28培养72-90 h)。
 
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GV3101(pSoup-p19)电击感受态细胞