ArcticExpress(DE3)感受态细胞 ,表达感受态细胞

ArcticExpress(DE3)：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
E.coliBF–ompThsdS(rB–mB–)dcm+TetRgalλ(DE3)endAHte[cpn10cpn60GentR]  
产品说明  
ArcticExpress(DE3)来源于E.coliB，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株，可促进表达蛋白的稳定。ArcticExpress(DE3)菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区，使得ArcticExpress(DE3)菌株可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，广泛用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress(DE3)菌株具有四环素，庆大霉素抗性，endA1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60GentR]的存在使ArcticExpress(DE3)可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60（来自嗜冷菌—Oleispiraantarctica）。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性，在ArcticExpress(DE3)细胞中表达时，可降低重组蛋白包涵体的形成，增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性，比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融性能。ArcticExpress(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.ArcticExpress(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（（平板中务必同时含有40ug/ml的庆大霉素和转化质粒本身的筛选抗生素；若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  
IPTG配制：  
Preparea1MsolutionofIPTG(Isopropyl-β-D-thiogalactoside;Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)  
bydissolving2.38gofIPTGinddwaterandadjustthefinalvolumeto10ml.Filtersterilizebeforeuse.  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有40ug/ml的庆大霉素，以防质粒丢失。  
3.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。  
4.ArcticExpress(DE3)感受态细胞具有四环素、庆大霉素抗性，不可用于具有四环素、庆大霉素抗性质粒的转化。