M15(pREP4)感受态细胞 ,表达感受态细胞

  
M15(pREP4)：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F-,Φ80ΔlacM15,thi,lac-,mtl-,recA+,KmR  
产品说明  
M15(pREP4)蛋白表达菌株含有pREP4质粒，该质粒通过p15A复制子启动复制，可以与许多原核表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中；同时该质粒携带lacI基因，可高效表达lac抑制蛋白，在IPTG诱导前可抑制目标蛋白的本底表达，特别适合毒性基因的表达。M15(pREP4)菌株是PQE系列质粒的配套菌株，特别适合PQE系列质粒或由E.coliT5启动子诱导表达的质粒的蛋白表达。pREP4质粒赋予该菌株卡那霉素抗性。M15(pREP4)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达2×108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.M15(pREP4)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取50μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养，M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时，需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。  
IPTG配制：  
Preparea1MsolutionofIPTG(Isopropyl-β-D-thiogalactoside;Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)  
bydissolving2.38gofIPTGinddwaterandadjustthefinalvolumeto10ml.Filtersterilizebeforeuse.  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时，需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。  
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  
4.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。