JM109(DE3)感受态细胞 ,表达感受态细胞

JM109(DE3)：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
endA1recA1gyrA96thi-1hsdR17(rk-,mk+)relA1supE44D(lac-proAB)[F´traD36proABlaqIqZΔM15](DE3)  
产品说明  
JM109(DE3)菌株来源于JM109，用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于JM109的染色体上，所以称为JM109(DE3)。可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选试验。JM109(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高于108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.JM109(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或  
LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  
IPTG配制：  
1M（mol/L）IPTG（分子式:C9H18O5S，分子量:238.30）溶液：称取2.38gIPTG固体，加入8mlddH2O溶解  
补足水到10ml用0.22um滤膜过滤除菌，分装即可。  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  
3.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。  
4.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。