Tuner(DE3)pLysS感受态细胞 ,表达感受态细胞

  
Tuner(DE3)pLysS：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcmlacY1(DE3)pLysSCamR  
产品说明  
Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因(半乳糖苷透性酶基因)突变株，此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入Tuner(DE3)细胞中即是Tuner(DE3)pLysS，pLysS表达T7溶菌酶，T7溶菌酶可以与T7RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Tuner(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.Tuner(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取50μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  
IPTG配制：  
Preparea1MsolutionofIPTG(Isopropyl-β-D-thiogalactoside;Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)bydissolving2.38gofIPTGinddwaterandadjustthefinalvolumeto10ml.Filtersterilizebeforeuse.  
氯霉素配制  
Chloramphenicol34mg/mlinethanol.Storeat-20℃.Useat34µg/ml.  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  
3.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-10mM均可）。  
4.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。  
5.Tuner(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。