C43(DE3) pLysS感受态细胞 ,表达感受态细胞

  
C43(DE3)pLysS：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F–ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pLysSCamR  
产品说明  
OverExpressC43(DE3)、OverExpressC41(DE3)两个菌株均起源于BL21(DE3)，其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpressC41(DE3)跟BL21(DE3)的区别在于其基因组含有至少一个未知突变，这个未知突变使其获得了高效表达毒性蛋白的能力，此突变位点参与大肠杆菌表达毒性蛋白时的细胞死亡途径；OverExpressC43(DE3)来源于OverExpressC41(DE3)，是通过筛选OverExpressC41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株获得。C43(DE3)菌株具有比C41(DE3)更强的表达毒性蛋白和疏水性蛋白的能力。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入C43(DE3)细胞中即是C43(DE3)pLysS，pLysS表达T7溶菌酶，T7溶菌酶可以与T7RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。C43(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.C43(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取50μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。