OrigamiB(DE3) pLysS感受态细胞 ,表达感受态细胞

OrigamiB(DE3)pLysS：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcmlacY1ahpC(DE3)gor522::Tn10trxB(KanR,TetR)pLysSCamR  
产品说明  
OrigamiB(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS可表达T7溶菌酶（T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达），适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。OrigamiB(DE3)pLysS菌株表达突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase)(trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathionereductase)(gor)，这两个酶是还原途径的关键酶，突变后有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。此外，该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有氯霉素、卡那霉素和四环素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素抗性质粒的表达。OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.OrigamiB(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.混入质粒时应轻柔操作。  
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  
4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。  
5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。  
6.具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。