Rosetta 2(DE3)感受态细胞 ,表达感受态细胞

Rosetta2(DE3)：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pRARE2(CamR)  
产品说明  
Rosetta2(DE3)菌株来源于BL21，是BL21的衍生菌株，为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株，这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入BL21(DE3)细胞中即是Rosetta2(DE3)，pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA和CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Rosetta2(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.Rosetta2(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的LB无菌培养液，37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取50μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.混入质粒时应轻柔操作。  
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  
4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。  
5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。  
6.具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。