Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞 ,表达感受态细胞

  
Rosetta-gamiB(DE3)：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcmlacY1ahpC(DE3)gor522::Tn10trxBpRARE(CamR,KanR,TetR)  
产品说明  
Rosetta-gamiB(DE3)菌株聚合了BL21，Tuner，Origami和Rosetta四种菌株的优点：  
＊lacY1基因(半乳糖苷透性酶基因)突变赋予其Tuner菌株的优点——IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。  
＊pRARE赋予其Rosetta菌株的优点——补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。  
＊gor522::Tn10trxB赋予其Origami菌株的优点——突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase)(trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathionereductase)(gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。  
＊该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。  
＊Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有卡那霉素，氯霉素，四环素抗性，由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.Rosetta-gamiB(DE3)菌株感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.混入质粒时应轻柔操作。  
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  
4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。  
5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。  
6.具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。