Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞 ,表达感受态细胞

  
Rosetta-gami(DE3)pLysS：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
Δ(ara-leu)7697ΔlacX74ΔphoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F´[lac+lacIqpro]gor522::Tn10trxB::kanpLysSRARE2(CamR,StrR,TetR)  
产品说明  
Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株聚合了不同原核表达菌株的优势：  
＊Rosetta-gami赋予其Rosetta和Origami的优点——补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平，并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase)(trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathionereductase)(gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。  
＊该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。  
＊该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素，氯霉素，链霉素，四环素抗性，为亮氨酸生长缺陷型菌株。Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。