BL21 Star(DE3)感受态细胞 ,表达感受态细胞

  
BL21Star(DE3)：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcmrne131(DE3)  
产品说明  
BL21Star(DE3)菌株源于BL21(DE3)菌株，含有rne131突变（RNaseE基因），RNaseE基因的突变降低了內源RNase的积累，增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而提高异源蛋白的表达水平。主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达，同时含有大肠杆菌RNA聚合酶，也可用于非T7启动子表达载体（pGEX，pMAL等）的蛋白表达。由于BL21Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高，所以不适合毒性蛋白的表达。BL21Star(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.BL21Star(DE3)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.混入质粒时应轻柔操作。  
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。  
4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。  
5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。