F-DH5α感受态细胞 ,克隆快转感受态细胞

  
F-DH5α：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F-φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169endA1recA1hsdR17(rk-,mk+)supE44λ-thi-1gyrA96relA1phoA  
产品说明  
DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。  
F-DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内完成转化、涂板操作，pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108cfu/μgDNA。  
快速转化操作方法(10min)  
1.提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。  
2.F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。  
3.用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。  
4.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。  
快速热激转化操作方法(25min,可提高转化效率)  
1.F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟(晃动会降低转化效率)。加入700μl不含抗生素的LB，37℃，200rpm复苏10分钟，涂板(均匀，表面无水渍)。  
3.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。  
注意事项  
1.F-DH5α快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7kb质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作：F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5分钟后，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置20分钟。42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中静置2分钟。加入700μlLB，37℃，200rpm复苏30分钟，涂板。  
2.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时应轻柔操作。  
3.F-DH5α快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可按热激转化操作，增加孵育步骤。