BW25113感受态细胞 ,克隆感受态细胞

  
BW25113:100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件（保质期）：-80℃（6个月）  
基因型  
F-,DE(araD-araB)567,lacZ4787(del)::rrnB-3,LAM-,rph-1,DE(rhaD-rhaB)568,hsdR514  
产品说明  
BW25113菌株来源于E.coliK-12W1485，是K12的衍生菌株，与MG1655类似，也是一种经过较少改造，比较接近于“野生型”的大肠杆菌工程菌株。BW25113作为母系菌株，可以用来制作E.coliKeioKnockout文库；同时可作为大肠杆菌模式菌株使用，用来制作各种基因的Knockout突变体。另外，BW25113可用于构建，扩繁质粒使用，不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶，以防提取的质粒被降解。pUC19质粒检测转化效率>0.5×109cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.BW25113感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心1分钟收集菌体，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。