JM330感受态细胞 ,克隆感受态细胞

JM330：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F-φ80lacZ∆M15∆(lacZYA-argF)U169recA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96relA1tonA  
产品说明  
JM330菌株(即DH5αT1PhageResistant)，来源于DH5α菌株。在DH5α大肠杆菌基因组中引入tonA，赋予其抗噬菌体T1,T5的能力，即为JM330。JM330菌株最大的特点是其可以在体内特异性降解甲基化质粒模板，广泛应用于各种DNA定点突变试验中。JM330菌株缺失核酸内切酶(endA1)和重组酶(recA1)，提高了质粒DNA的产量和质量；lacZΔM15的存在使JM330可用于蓝、白斑筛选。JM330感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1×109cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.JM330感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（例如：DpnI消化产物等）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200rpm复苏70分钟。  
4.5000rpm离心1分钟收集菌体，留取50μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱至少15小时。  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。  
2.JM330可以对未被DpnI降解掉的质粒模板进行进一步的降解，因此可以保证定点突变具有更高的阳性率。  
3.转化高浓度的质粒或DpnI消化产物可相应减少最终用于涂板的菌量。