EPI300感受态细胞 ,克隆感受态细胞

  
EPI300:100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件（保质期）：-80℃（6个月）  
基因型  
F–mcrA∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80dlacZ∆M15∆lacX74recA1endA1araD139∆(ara,leu)7697galUgalKλ–rpsLnupGtrfAdhfr.  
产品说明  
EPI300细胞含有一个突变的trfA基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有oriV复制子的质粒的高拷贝扩繁，诱导剂Ⅰ可以诱导trfA基因的表达。当含有oriV复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，oriV复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导剂Ⅰ，oriV复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低oriV复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆。[mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（例如：哺乳动物基因组DNA）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。EPI300感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达3×108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.EPI300感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或  
LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。  
注意事项  
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。