大肠杆菌PCR扩增试剂盒 ,100T

本试剂盒是一种使用特别便捷的含有蓝色和橙色染料(电泳位置分别约4kb和50bp)的2倍浓度的PCR预混液，含有2X Taq DNA Polymerase、2X PCR Buffer、2X dNTP和2X Loading Buffer等，只需加入大肠杆菌菌落或菌落稀释物、引物和水即可进行PCR扩增，并且扩增完毕后可以直接上样电泳。本试剂盒主要适用于质粒转化大肠杆菌后阳性克隆的菌落PCR筛选和鉴定。

本试剂盒对于大肠杆菌菌落的兼容性好。本试剂盒经过反复优化，确保直接挑取菌落进行PCR的扩增效果良好，菌落的存在不会显著干扰PCR反应。

本试剂盒使用特别便捷。菌落直接PCR试剂盒中提供的E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X)已经含有所有的通用组分，用户只需自备引物和水即可对大肠杆菌菌落进行PCR扩增。它大大简化了PCR操作，使操作更加快捷，也减少了PCR操作过程中可能导致的污染，使PCR的重复性更好；同时E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X)中已经包含了上样缓冲液组分，PCR扩增结束后即可直接上样电泳，无需添加上样缓冲液。

本试剂盒扩增效果好。本试剂盒可以扩增出长达8kb的片段，但通常更适合用于扩增2kb以下的DNA片段。

本试剂盒中提供了双色染料，便于电泳时观察电泳进程。本产品中加入了蓝色和橙色的电泳示踪染料(整体呈现绿色)，其在浓度为1%琼脂糖胶中的迁移位置分别大约位于4kb和50bp处。PCR结束后可直接进行电泳检测，无需再添加上样缓冲液。蓝色和橙色示踪染料不会影响对相应DNA条带的观察和检测。

本产品稳定性高。经测试，本试剂盒反复冻融15次后对PCR的扩增效果无显著影响。反复冻融15次前后，使用不同引物扩增100-1500bp间不同长度目的片段的效果如图1所示。

图1. 本产品用于大肠杆菌菌落PCR的效果图。特定质粒转化DH5α菌株后涂板，第二天挑取10个克隆，采用质粒上的通用引物并使用本试剂盒进行菌落PCR检测。PCR扩增片段为1500bp左右。1-4，直接挑取克隆使用本试剂盒进行PCR扩增；5-8，挑取克隆后加入到10μl水中混匀后取3μl用于本试剂盒的PCR扩增；9-10，本试剂盒反复冻融15次后直接挑取克隆进行PCR扩增检测。

每毫升E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X)若用于50微升的PCR反应体系，足够用于40个反应；若用于20微升的PCR反应体系，足够用于100个反应。

-20℃保存，至少一年有效。适当避免反复冻融。如需频繁使用，可取适量存放于4℃，至少3天内有效。

由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Fusion™酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

Taq DNA polymerase在PCR过程中每个循环的出错几率约为2.2×10^-5，对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、Taq DNA polymerase等。对于普通的PCR或RT-PCR进行定性或定量检测，Taq DNA polymerase是最佳选择。

尽管本产品经过15次反复冻融后仍具有和冻融前几乎相同的PCR扩增效果，但仍宜适当避免反复冻融本产品，多次反复冻融可能使产品性能下降。

使用本产品前，一定要完全融化，并上下颠倒轻轻混匀后才能使用，尽量避免起泡。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。