BL21(AI)感受态细胞 ,表达感受态细胞

  
BL21(AI)：100μl/支  
pUC19(controlvector，10pg/μl):10μl  
保存条件(保质期)：-80℃（6个月）  
基因型  
F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcmaraB::T7RNAP-tetA  
产品说明  
BL21(AI)是大肠杆菌B/r型菌株(E.coliB/r)。BL21(AI)来源于BL21菌株，为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株，这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。在培养基中添加L-阿拉伯糖可诱导araBAD启动子下游T7RNA聚合酶的表达进而促进目的蛋白的表达。在培养基中添加葡萄糖可抑制araBAD启动子下游T7RNA聚合酶的表达进而抑制目的蛋白的表达。BL21(AI)感受态细胞适用于任何以T7启动子为基础的表达载体，能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株能够对体内的T7RNA聚合酶水平进行高效调节，BL21(AI)感受态细胞能够表达对其他BL21细胞有毒性或抑制生长的蛋白。普通重组蛋白在BL21(AI)菌株中获得产量和其他BL21菌株产量相当；对大部分毒性蛋白，在BL21(AI)菌株中获得的产量高于BL21(DE3)pLysS菌株或BL21(DE3)菌株。BL21(AI)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μgDNA。  
操作方法  
1.BL21(AI)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。  
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含抗生素的2YT或LB培养基上。  
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。  
注意：  
1.BrianCaliendo(Voigt实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中，而pCP20转化到其他菌株中都很正常，但是菌体原因未知。  
2.不加葡萄糖，BL21(AI)细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低，加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。